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使用說明：

產(chǎn)品描述

伊文思藍(lán)(Evans Blue, CAS NO: 314-13-6) ,也稱作埃文斯藍(lán)，是一種非膜滲透性的染料。當(dāng)質(zhì)膜受損，染料能進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，從而將其染成藍(lán)色，可用來檢測細(xì)胞活力。伊文思藍(lán)還能用來研究血腦屏障(BBB)滲透性，通過與白蛋白結(jié)合從而指示血腦屏障穿透蛋白能力。

推薦使用0.5%的伊文思藍(lán)染色液，使用很方便，直接加入樣本染色即可。

操作說明：

一.血腦屏障通透性

1.1 取處理后的動(dòng)物(以小鼠為例) ,靜脈注射伊文思藍(lán)染色液(0.5%) ,使得小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5~ 1h后處死小鼠，取出目的腦組織。 [注意] :伊文思藍(lán)染色液的注射用量需要根據(jù)動(dòng)物類型以及體重來決定。

1.2 將腦組織置于1.5ml離心管中，加入1ml PBS， 迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿，4°C離心。

1.3 取上清，加入等量三氯乙酸，4°C孵育。該步驟亦可采用如下操作:取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室溫孵育24h。

1.4 4℃離心15min。

1.5 取上述溶液，用分光光度計(jì)測620 nm下的OD值。同時(shí)測定已知不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)伊文思藍(lán)的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測樣品的伊文思藍(lán)含量.

二、細(xì)胞活力鑒定

2.1取100μl重縣細(xì)胞到常規(guī)離心管內(nèi)，加入100μl伊文思藍(lán)染色液(0.5%) 輕輕混勻(染色時(shí)間可適當(dāng)延長，但不宜超過10min)。

2.2吸取少量經(jīng)過染色后的細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量,每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù)500個(gè)細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下:細(xì)胞存活率= (細(xì)胞總數(shù)-藍(lán)色細(xì)胞數(shù)) /細(xì)胞總數(shù)x100%

注意事項(xiàng)：

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。